Au milieu du XVIIe siècle, le cardinal Girolamo I Colonna et son neveu Lorenzo Onofrio Colonna ont commandé la galerie Colonna, un véritable joyau du baroque romain. L'inauguration a eu lieu en 1700 par Philippe II, fils de Lorenzo Onofrio. Le projet original a été conçu par l'architecte Antonio del Grande, mais il a ensuite été suivi par la touche de Gian Lorenzo Bernini, Paolo Schor et Carlo Fontana dans la dernière décennie du siècle. La galerie a été conçue comme une grande salle de réception qui glorifiait la victoire de la flotte chrétienne sur les Turcs lors de la bataille de Lépante en 1571, au cours de laquelle Marcantonio II Colonna a triomphé. En effet, toute la décoration de la Galerie lui est dédiée et les magnifiques fresques de la Grande Salle, réalisées par Coli et Gherardi, représentent l'important événement historique. Les fresques de la salle des Passages, avec l'extraordinaire « Allégorie de la bataille » datant du XVIIIe siècle, et la salle de la Colonne, riche en détails sur la célébration de Marcantonio II et son apothéose, sont également liées à l'événement.

En plus des chefs-d'œuvre picturaux du Tintoret, de Guido Reni, de Pietro da Cortona et d'autres qui en font un véritable joyau, la galerie présente des marbres anciens et des cadres d'inspiration baroque. Les magnifiques et précieux coffrets en bois et en pierres précieuses, exemples d'une valeur inestimable du travail de l'ébène et de l'ivoire, se distinguent également.

Une autre merveille inégalée de la galerie est l'appartement de la princesse Isabelle, une aile du bâtiment datant du XVe siècle qui fut la résidence du pape Martin V. Parmi les principales attractions de l'appartement, citons les fresques de Bernardino di Betto, mieux connu sous le nom de Pinturicchio, et les décorations ultérieures produites par Gaspard Dughet et Carlo Cesi. La peinture nordique y trouve également sa place grâce aux tableaux de Brueghel l'Ancien et aux vues de Van Wittel, précieusement conservés et exposés ici aujourd'hui. L'appartement doit son nom à la princesse Isabelle Colonna qui y séjourna jusqu'en 1984 : ses petits-enfants ont voulu lui consacrer cette aile au passé si significatif et à l'aspect si somptueux.