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L'intérieur de l'église S. Maria dell'Orto a sans aucun doute une apparence majestueuse, mais pour certains, le système de stucs et de fresques qui le recouvre peut sembler un peu trop chargé pour être vraiment aristocratique. En effet, c'était une église de riches, mais pas de nobles. Elle se trouvait dans une zone commerciale et agricole, comme son nom l'indique, qui gravite autour de la porte Portese et du port de Ripa Grande, sur le Tibre. Sa construction, commencée vers 1495 et achevée en 1567, fut financée par les « Universités » des Pizzicaroli et des Ortolani, des Fruttaroli et Limonari, des Pollaroli et Barilari, des Vignaioli et Molinari, des Sensali et même des Vermicellari, les producteurs de pâtes. Ce sont les associations d'agriculteurs, de grossistes, d'artisans et de marchands qui ont assuré l'approvisionnement de la ville, progressivement réunis en une seule confrérie. L'occasion fut offerte par un miracle qui s'est produit ici, peut-être en 1488, à un invalide qui avait prié une Vierge peinte près de l'entrée de son jardin. À travers cette église, les commanditaires aspiraient à gagner un plus grand prestige social. L'objectif fut atteint exactement un siècle après le miracle, en 1588, lorsque le pape Sixte V éleva leur confrérie au rang d'archiconfrérie de S. Maria dell'Orto, avec le privilège de pouvoir sauver chaque année un condamné à mort.
L'église doit principalement son implantation à l'architecte Guidetto Guidetti, l'image vénérée de la Vierge à l'Enfant est conservée sur le maître-autel, parmi les fresques de Federico et Taddeo Zuccari. Les stucs exubérants et la plupart des fresques qui décorent l'intérieur remontent à la première partie du XVIIIe siècle, ici et là, en les observant attentivement, on distingue des symboles et des représentations qui évoquent les métiers des frères. La beauté et la luminosité de l'intérieur ont incité plusieurs réalisateurs à y tourner des scènes se déroulant dans des lieux de culte. Ses nefs sont reconnaissables, par exemple, dans « Rome, ville ouverte » de Roberto Rossellini (1945), qui en fait (mais seulement à l'intérieur) l'église de Don Pietro, le prêtre interprété par Aldo Fabrizi. Dans « Le célibataire », Antonio Pietrangeli (1955) met en scène ici le mariage du protagoniste, interprété par Alberto Sordi. Pupi Avati y a tourné des funérailles dans « Il papà di Giovanna » (2008). L'église est également, depuis des siècles, le point de référence des catholiques d'origine japonaise vivant à Rome.
