Localizada dentro dos Museus do Vaticano, a Biblioteca Apostólica é uma das maiores de Roma, se não de Itália. A história muito antiga desta biblioteca começa no século XV com o Papa Nicolau V, que queria que os códices latinos, gregos e hebraicos em sua posse fossem tornados públicos. O seu projeto foi depois ampliado por Sisto IV com a emissão da bula Ad decorem militantis Ecclesiae, depois por Leão X e Paulo V. Entre 1587 e 1589, quando a sede inicial já não conseguia conter o material em contínuo crescimento, Sisto V decidiu mandar construir uma nova sede e encarregou o arquiteto Domenico Fontana do projeto. O edifício, que ainda alberga a biblioteca, foi construído sobre as escadas divisórias que ligavam o Pátio do Belvedere ao que é agora conhecido como o Pátio da Biblioteca. No interior, no andar superior, encontra-se o grandioso Salão Sistino, uma grande sala que serve de sala de leitura, ricamente decorada com grotescos nas abóbadas e vistas de Roma com os monumentos mais famosos na base das velas e nas lunetas nas cabeceiras das duas naves. Atualmente, a Biblioteca do Vaticano alberga um património muito rico, composto por cerca de 180 000 volumes manuscritos e de arquivo, 1 600 000 livros impressos, cerca de 9000 incunábulos, 300 000 moedas e medalhas, mais de 150 000 gravuras, milhares de desenhos e matrizes e mais de 200 000 fotografias. Entre as peças mais famosas da Biblioteca está o "Codex Vaticanus", o mais antigo manuscrito completo da Bíblia conhecido, a Bíblia de Gutenberg, o "Sidereus Nuncius" de Galileu Galilei, a bula papal Antiquorum habet fida relatio com a qual o Papa Bonifácio VIII anunciou o primeiro jubileu em 1300 e a moeda de ouro colocada por Carlos Magno no túmulo de São Pedro em 781.